Os imunoensaios são técnicas baseadas em placas que podem detetar e quantificar muitos tipos de moléculas, através de reações anticorpo-antigénio. Um imunoensaio normalmente envolve um analito, um anticorpo direcionado e marcadores. A classificação dos imunoensaios é baseada no tipo de marcador utilizado, que inclui enzimas (ELISA), moléculas/marcadores emissores de luz (e.g., imunoensaios de quimioluminescência e fluorescência) e isótopos radioativos (radioimunoensaios). Estes imunoensaios especializados são relativamente sensíveis, específicos, baratos e rápidos, e são amplamente utilizados num ambiente clínico. Os imunoensaios são usados no diagnóstico de doenças infeciosas, identificação de marcadores tumorais, testes de alergia e monitorização dos níveis de fármacos.
Última atualização: Sep 28, 2022
Os imunoensaios são técnicas baseadas em placas, projetadas para detetar e quantificar peptídeos, proteínas, anticorpos e hormonas. O elemento mais crucial da estratégia de deteção é uma reação antigénio-anticorpo altamente específica.
O tipo de marcação define o imunoensaio que está a ser realizado:
Existem 4 tipos principais de ELISA, que são variações do processo geral de imunoensaio:
Mecanismo de ELISA direto: É adicionado um antigénio alvo a uma placa juntamente com anticorpos marcados com enzimas específicas para aquele antigénio. Após a incubação, os anticorpos não ligados em excesso são removidos por lavagem e é adicionado um substrato. Na presença do marcador enzimático ocorre uma reação que resulta numa mudança de cor.
Image por Lecturio.
Mecanismo de ELISA indireto: É adicionado um antigénio alvo a uma placa revestida com anticorpos primários. É formado um complexo anticorpo-antigénio após a incubação. O excesso de anticorpo é removido por lavagem e são adicionados anticorpos secundários marcados com enzimas, que se ligam ao complexo anticorpo-antigénio. Os anticorpos em excesso são lavados e adiciona-se o substrato. A presença do marcador enzimático resulta numa mudança de cor.
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Mecanismo de imunoensaio sanduíche:
Da esquerda para a direita: O antigénio do analito é adicionado a uma placa revestida de anticorpo. Os antigénios não ligados são removidos por lavagem e são adicionados anticorpos secundários marcados com enzimas, que se ligam aos antigénios. O excesso de anticorpos marcados não ligados é removido por lavagem. O substrato é adicionado e a mudança de cor resultante é detetada/medida.
Mecanismo de ELISA competitivo:
Da esquerda para a direita: Um antigénio alvo e um antigénio marcado com enzima são adicionados a uma placa revestida de anticorpo. Os antigénios competem pela ligação aos anticorpos. Em seguida, é adicionado um substrato e a mudança de cor subsequente é detetada/medida. Ao contrário de outras formas de imunoensaios, uma menor mudança de cor indica uma concentração mais alta do antigénio alvo (já que não contém o marcador enzimático).
Os imunoensaios têm uma ampla gama de aplicações clínicas. Os exemplos listados abaixo não são exaustivos.
Os imunoensaios podem ser usados para identificar microrganismos diretamente (com base em antigénios ou toxinas) ou avaliar indiretamente os anticorpos para o agente infecioso. Alguns exemplos incluem:
Os imunoensaios podem ser utilizados para detetar marcadores tumorais. Alguns exemplos incluem:
Os imunoensaios podem ser usados para detetar anticorpos IgE para alergénios específicos:
A monitorização terapêutica de fármacos é uma aplicação importante dos imunoensaios. Os exemplos incluem a monitorização dos níveis de:
Exames laboratoriais adicionais onde os imunoensaios podem ser utilizados incluem:
As vantagens dependem do tipo de imunoensaio utilizado; no entanto, geralmente, são:
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