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Los inmunoensayos son técnicas basadas en placas que pueden detectar y cuantificar muchos tipos de moléculas a través de reacciones anticuerpo-antígeno. Un inmunoensayo generalmente involucra un analito, un anticuerpo específico y marcadores. La clasificación de los inmunoensayos se basa en el tipo de marcador utilizado, que incluye enzimas (ELISA, por sus siglas en inglés), moléculas/trazadores emisores de luz (e.g., inmunoensayos de quimioluminiscencia y fluorescencia) e isótopos radiactivos (radioinmunoensayos). Estos inmunoensayos especializados son relativamente sensibles, específicos, económicos y rápidos, y se usan ampliamente en un entorno clínico. Los inmunoensayos se utilizan en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, la identificación de marcadores tumorales, las pruebas de alergia y el control de los niveles de medicamentos.
Última actualización: Sep 28, 2022
Los inmunoensayos son técnicas de ensayo basadas en placas diseñadas para detectar y cuantificar péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas. El elemento más crucial de la estrategia de detección es una reacción antígeno-anticuerpo altamente específica.
El tipo de marcador define el inmunoensayo que se está realizando:
Hay 4 tipos principales de ELISA, que son variaciones del proceso general de inmunoensayo:
Mecanismo de ELISA directo: Se agrega un antígeno objetivo a una placa junto con anticuerpos marcados con enzimas específicos para ese antígeno. Después de la incubación, el exceso de anticuerpos no unidos se elimina mediante lavado y se agrega un sustrato. En presencia del marcador enzimático, se produce una reacción que da como resultado un cambio de color.
Imagen por Lecturio.
Mecanismo de ELISA indirecto: Se agrega un antígeno diana a una placa recubierta con anticuerpos primarios. Después de la incubación se forma un complejo antígeno-anticuerpo. El exceso de anticuerpo se elimina mediante lavado y se agregan anticuerpos secundarios marcados con enzimas, que se unen al complejo anticuerpo-antígeno. El exceso de anticuerpos se elimina por lavado y se añade el sustrato. La presencia del marcador enzimático da como resultado un cambio de color.
Imagen por Lecturio.
Mecanismo de inmunoensayo sándwich:
De izquierda a derecha: el antígeno del analito se agrega a una placa recubierta de anticuerpos. Los antígenos no unidos se eliminan mediante lavado y se agregan anticuerpos secundarios marcados con enzimas, que se unen a los antígenos. El exceso de anticuerpos marcados no unidos se elimina mediante lavado. Se añade el sustrato y se detecta/mide el cambio de color resultante.
Mecanismo de ELISA competitivo:
De izquierda a derecha: se agregan un antígeno objetivo y un antígeno marcado con enzima a una placa recubierta de anticuerpos. Los antígenos compiten por unirse a los anticuerpos. A continuación, se añade un sustrato y se detecta/mide el cambio de color subsiguiente. A diferencia de otras formas de inmunoensayos, menos cambio de color indica una mayor concentración del antígeno objetivo (ya que no contiene el marcador enzimático).
Los inmunoensayos tienen una amplia gama de aplicaciones clínicas. Los ejemplos enumerados a continuación no son todos ellos.
Los inmunoensayos se pueden utilizar para identificar directamente microorganismos (basados en antígenos o toxinas) o evaluar indirectamente los anticuerpos contra el agente infeccioso. Algunos ejemplos son:
Pueden utilizarse inmunoensayos para detectar marcadores tumorales. Ejemplos incluyen:
Los inmunoensayos se pueden utilizar para detectar anticuerpos IgE contra alérgenos específicos:
La monitorización de medicamentos terapéuticos es una aplicación importante de los inmunoensayos. Los ejemplos incluyen el control de los niveles de medicamentos de:
Las pruebas de laboratorio adicionales donde se pueden utilizar inmunoensayos incluyen:
Las ventajas dependen del tipo de inmunoensayo utilizado; sin embargo, en general, son:
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